سالماتی حیاتیاتی تحقیق کے طریقوں اور ان کے استعمال کے

سالماتی حیاتیاتی تحقیق کے طریقوں کو جدید ادویات، فارنسک سائنس اور حیاتیات میں ایک اہم کردار ادا کرتے ہیں. ڈی این اے اور آر این اے کے مطالعہ میں ترقی کی بدولت، اس شخص پیکر کے جینوم کا تعین ایسڈ، وغیرہ کی ایک مرکب میں مطلوبہ nucleic ایسڈ کو تسلیم کرنے کے لئے، causative ایجنٹ کو دریافت کرنے کے قابل ہے

سالماتی حیاتیاتی طریقوں. یہ کیا ہے؟

واپس سائنسدانوں کی 70-80s میں سمجھنے کے لئے سب سے پہلے تھا انسانی جینوم. یہ واقعہ جینیاتی انجینئرنگ اور سالماتی حیاتیات کی ترقی کو فروغ دیا. ڈی این اے اور آر این اے کی خصوصیات میں مطالعہ کا مطلب ہے کہ یہ بیماری تشخیص، مطالعہ جین کے مقصد کے لئے ان nucleic ایسڈ استعمال کرنے کے لئے اب یہ ممکن ہے کہ.

ڈی این اے اور آر این اے کی تیاری

سالماتی حیاتیاتی تشخیصی طریقوں کو اکثر اس: مواد کے شروع ہونے کی ضرورت ہوتی ہے nucleic ایسڈ. زندہ اجسام کے خلیات سے ان چیزوں کو منتخب کرنے کے لئے کئی طریقے ہیں. ہر ایک اس کے فوائد اور نقصانات ہیں، اور خالص شکل میں nucleic تیزاب الگ تھلگ کرنے کا ایک طریقہ کا انتخاب کرتے وقت یہ سمجھا جانا چاہئے.

1. Marmur کر ڈی این اے کی تیاری. طریقہ، شراب مادہ کی مرکب کے علاج میں پر مشتمل ہوتا ہے خالص DNA نتیجے precipitates کے. اس طریقہ کار کے منفی پہلو corrosive مادہ، phenol اور کلوروفارم کا استعمال ہے.

2. بوم پر ڈی این اے کی تنہائی. یہاں استعمال کیا جاتا ہے کہ اہم مادہ - guanidine thiocyanate (GuSCN) ہے. اس کا جمع کو فروغ deoxyribonucleic ایسڈ جس سے اس کے بعد ایک خصوصی بفر کے اسباب کی طرف سے جمع کیا جا سکتا ہے خصوصی ذیلی یا زیریں طبق، پر. تاہم GuSCN - TCP کی ایک inhibitor ہے، اور اس کی بھی ایک چھوٹے سے حصے کے ڈی این اے میں جمع ہو جاتا ہے nucleic ایسڈ کے ساتھ کام کرتے وقت اہم ہے جس میریز چین ری، یقینا اثر انداز کر سکتے ہیں.

3. نجاست کی ورن. طریقہ کار کہ انو میں خود dehoksiribonukleinovoy ایسڈ اور نجاست جمع نہیں کر رہے ہیں پچھلے والوں سے مختلف ہے. ایسا کرنے کے لئے، آئن یکسچینجرس کا استعمال. نقصان نہیں تمام مادہ حل کر سکتے ہیں.

4. بڑے پیمانے پر اسکریننگ. یہ طریقہ آپ ڈی این اے انو کی ساخت، اور کچھ اعداد و شمار حاصل کرنے کے لئے ضرورت کے بارے میں درست معلومات حاصل کرنے کی ضرورت نہیں ہے جب صورتوں میں استعمال ہوتا ہے. وجہ ڈٹرجنٹ، خاص طور alkalies ہینڈلنگ جب nucleic ایسڈ کی ساخت کو نقصان پہنچا جا سکتا ہے.

تحقیق کے طریقے کی درجہ بندی

تحقیق کے تمام سالماتی حیاتیاتی طریقوں تین بڑے گروپوں میں تقسیم کیا جاتا ہے:

1. پروردن (خامروں کی ایک کثرتیت کا استعمال کرتے ہوئے). جس تشخیصی طریقوں میں سے بہت سے میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے میریز چین ری، - یہ پی سی آر بھی شامل ہے.

2. Neamplifikatsionnye. طریقوں میں سے اس گروہ nucleic ایسڈ مرکب کے کام کے ساتھ براہ راست منسلک ہے. مثال کے طور پر، 3 قسم blots میں ہیں سوستانی سنکرن، وغیرہ میں

3. طریقے سے ایک مخصوص ڈی این اے یا آر این اے کی تحقیقات کو باندی جس کی تحقیقات انو سے سگنل کے اعتراف پر مبنی ہے. مثال - سنکرن کے نظام Hybride گرفتاری کا نظام حل (HC2).

سالماتی حیاتیاتی تحقیق کے طریقوں میں استعمال کیا جا سکتا ہے کہ خامروں

کئی سالماتی تشخیصی تکنیک کے خامروں کی وسیع رینج کا استعمال شامل ہے. ذیل میں سب سے زیادہ کثرت سے استعمال کیا جاتا ہے:

1. پابندی ینجائم - ضروری حصوں کو ڈی این اے انو "کٹ".

2. ڈی این اے پالی میریز - ایک ڈبل پھنسے ہوئے deoxyribonucleic ایسڈ انو synthesizes.

3. ریورس transcriptase (transcriptase ریورس) - ایک آرینی سانچے سے DNA synthesize کرنے کے لئے استعمال.

4. DNA ligase - nucleotides کی درمیان phosphodiester بانڈ کے قیام کے لئے ذمہ دار ہے.

5. exonuclease - deoxyribonucleic ایسڈ انو کے آخر حصے سے nucleotides کی ہٹاتا ہے.

پیسیآر - ڈی این اے پروردن کے بنیادی طریقہ کار

پالی میریز چین ری ایکشن (PCR) وسیع پیمانے پر جدید سالماتی حیاتیات میں استعمال کیا جاتا ہے. یہ طریقہ، ایک ڈی این اے انو کاپیاں (بلند انو) کی ایک بڑی تعداد حاصل کیا جا سکتا ہے جس میں.

پی سی آر کے بنیادی افعال:

- بیماریوں کی تشخیص؛

- DNA طبقات کلوننگ، جین.

پالی میریز چین ری مندرجہ ذیل عناصر کی ضرورت ہوتی ہے کے لئے لے: ابتدائی ڈی این اے انو، ایک thermostable ڈی این اے پالی میریز (Taq یا Pfu)، deoxyribonucleotide فاسفیٹس (نائٹروجن اڈوں کے ذرائع)، پرائمرس (2 پرائمر 1 ڈی این اے انو) اور خود ایک بفر نظام جس کرانے سکتا تمام رد عمل.

داناراشن، پرائمر annealing اور بڑھاو: PCR تین مراحل پر مشتمل ہے.

1. داناراشن. 94-95 ڈگری سینٹی گریڈ تک proshodit کے درجہ حرارت میں ڈی این اے کی دو زنجیروں کے درمیان ہائیڈروجن بانڈ کو توڑنے، اور نتیجے کے طور پر ہم دو سنگل پھنسے ہوئے سالموں ملتا ہے.

2. لئے annealed پرائمرس. 50-60 ڈگری کے درجہ حرارت میں سینٹی گریڈ تکمیلی کی قسم کے مطابق سنگل پھنسے ہوئے nucleic ایسڈ انو کے سروں پر الحاق پرائمرس وقت ہوتی ہے.

3. بڑھاو. 72 ڈگری کے درجہ حرارت میں سنشلیشیت بیٹی ڈبل deoxyribonucleic ایسڈ انو پھنسے ہوئے کیا جاتا ہے.

ڈی این اے کی ترتیب کے

سالماتی حیاتیاتی تحقیق کے طریقوں کو اکثر deoxyribonucleic ایسڈ کا ایک مالیکیول میں nucleotides کی کے تسلسل کے علم کی ضرورت ہوتی ہے. اس بات کا تعین کرنے کے جینیاتی کوڈ کی ترتیب. مستقبل کے آناخت تشخیص انسانی تسلسل کے تعین میں حاصل علم کی بنیاد پر کیا جائے گا.

ترتیب کی درج ذیل اقسام:

• Maxam-گلبرٹ کی طرف سے ترتیب؛
• سانگر ترتیب؛
• pyrosequencing؛
• nanoporovoe تخکرمن.